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實驗分析數據為什么容易出錯

更新時間:2013-07-03   點擊次數:2411次

 今日,據售后客戶的反饋報告顯示,很多客戶實驗做出的分析有問題,這種現象曾在美國Scripps Research Institute的研究員Geoffrey Chang發現過,他用來分析實驗數據的程序發生錯誤,因此只能發表聲明撤回五篇已發表的論文,包含三篇發表在Science上的論文。

 事情發生在2006年九月,一名瑞士的研究員在Nature上質疑Geoffrey Chang在2001年發表于Science上的一個蛋白質結構有問題。結果仔細檢查后竟然發現,他的團隊所寫的用來分析實驗數據的程序將兩行數據的符號顛倒了,結果將他團隊用來決定蛋白質結構的電子密度顛倒了過來。因此就這么得到了錯誤的結果。不過錯誤的結果導出了一個看起來依舊合理的蛋白質結構,所以這個錯誤才沒有被發現。之后,不知情的研究人員繼續利用這一套軟件分析之后的實驗數據,導致了整起事件。
 
    在研究室中,市面上所販賣的套裝商業軟件往往需要使用者額外增加一些指令以協助研究人員分析數據。但是很可能這些額外寫出的程序會含有一些很不容易看出來的小BUG,然后運算的結果照樣給你一個看起來合理的結果。如果不仔細確認所有的環節,就會造成上述的悲慘結果。
 
    由此可知,不論是實驗或撰寫程序,研究人員皆要小心為上,確認任何一個環節都是無懈可擊。

對此我司現公布實驗試劑導致產品檢驗質量有可能出現的一些問題:

ELISA質量保證是一個復雜的過程,許多重要的環節都影響到檢測的質量:

一、方法學的影響

ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的不公平競爭等因素的影響,結果重復性較差,質量較難控制。

二、試劑因素

不 同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條 件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質控體系及重新評估試劑的復雜過程,并且能夠保證結果的穩定性;對于效期短、使用率低的試劑,應當 小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復凍融造成試劑的失效。

1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2、實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

三、樣本因素

標本干擾因素包括內源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等,后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。

將 抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合 的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對 不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附 力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。

不易吸附 在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。 可將聚苯乙烯板先經紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質,如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包 被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物素系統作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用于 各種抗原物質的定量測定。
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