注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

研究意義：

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測(cè)定原理：

DPPH·為穩(wěn)定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中，在 515nm 處有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化劑時(shí)，會(huì)發(fā)生脫色反應(yīng)，因此可用吸光度的變化并以 Trolox 作為對(duì)照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 120mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體 45mL×1  瓶，避光保存。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA   抗凝）4℃，5000rpm  離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過(guò)30 d）后再測(cè)定。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

操作步驟：

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 515nm。

2、操作表（在 EP 管中反應(yīng)）

注意：空白管只需測(cè)定一次，若A_測(cè)定小于 0.2，需用提取液稀釋后檢測(cè)。